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上篇我們有講到高效液相色譜儀HPLC檢測(cè)器的類型，其中紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器是液相色譜儀HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見(jiàn)光度計(jì)。
紫外吸收檢測(cè)器UV檢測(cè)器是液相色譜儀HPLC中最常用的檢測(cè)器，它占液相色譜儀HPLC檢測(cè)器使用率的75%，生產(chǎn)液相色譜的廠家基本都會(huì)配帶這種檢測(cè)器。
紫外吸收檢測(cè)器UV檢測(cè)器特點(diǎn)
● 靈敏度高，最小檢測(cè)量可達(dá)10-9g/mL，也可以檢測(cè)對(duì)于紫外吸收弱的組分；
● 線性范圍寬，大多數(shù)UV檢測(cè)器可以在1.5-2.0AU下保持良好的線性；
● 不易受溫度、流速等因素的影響
● 可用于梯度洗脫
● 可與不同檢測(cè)器串聯(lián)使用，如雙光路雙流路紫外/熒光檢測(cè)器(UV/FLD-1)
紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見(jiàn)區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng)，并安裝一個(gè)光柵型單色器，其波長(zhǎng)選擇范圍寬(190nm～800nm)。它有兩個(gè)流通池，一個(gè)作參比，一個(gè)作測(cè)量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過(guò)純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無(wú)吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無(wú)信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號(hào)輸出，輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān)。
局限：流動(dòng)相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動(dòng)相，每種溶劑都有截止波長(zhǎng)，當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過(guò)溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)。
總結(jié)紫外吸收檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)
基于試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外可見(jiàn)光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度成正比
1. 優(yōu)點(diǎn)
① 靈敏度高，其最小檢測(cè)量10-9g/mL；
② 線性范圍寬；
③ 可用于梯度洗脫；
④ 波長(zhǎng)可選，易于操作；
⑤ 可與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用
2. 缺點(diǎn)
① 對(duì)紫外光完全不吸收的試樣不能檢測(cè)；
② 溶劑的選擇受限制
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