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二手高效液相色譜的分析
二手高效液相色譜法和其它分析方法相比具有很高的分辨率，為了達(dá)到zui佳的分離效果可以選擇流動(dòng)相和固定相:同時(shí)它的分析速度很快，一般只需要幾分鐘或者即使分鐘;它還具有很高的重復(fù)性，使用樣品還可以回收;它使用的色譜柱還可以重復(fù)使用，非常環(huán)保;具較高的自動(dòng)化程度，在進(jìn)行分析時(shí)，分析的精確度也很高。所以高液相色譜法被廣泛應(yīng)用，尤其是對(duì)大部分的有機(jī)化合物進(jìn)行分離和分析，在分離和分析高沸點(diǎn)、極性強(qiáng)、大分子、熱穩(wěn)定差的化合物時(shí)有很大的優(yōu)勢(shì)。
由于分離機(jī)制不同，二手高效液相色譜法可分為以下幾類(lèi)：
一、吸附色譜法
以吸附劑為固定相的色譜方法稱(chēng)為吸附色譜法。使用zui多的吸附色譜固定相是硅膠，流動(dòng)相一般使用一種種或多種有機(jī)溶劑的混合溶劑。在吸附色譜中,不同的組分因和固定相吸附力的不同而被分離。組分的極性越大、固定相的吸附力越強(qiáng)，則保留時(shí)間越長(zhǎng)。流動(dòng)相的極性越大，洗脫力越強(qiáng)，則組分的保留時(shí)間越短。
二、液-液分配色譜法
液-液分配色譜的固定相和流動(dòng)相是互不相溶的兩種溶劑，分離時(shí)，組分溶入兩相，不同的組分因分配系數(shù)(K)的不同而被分離。目前廣泛使用的化學(xué)鍵合固定相是將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體上而制成的，使用化學(xué)鍵合固定相的色譜方法(簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相色譜法)可以用分配色譜的原理加以解釋。鍵合相色譜法在HPLC中占有極其重要的地位，是應(yīng)用zui廣的色譜法。
三、離子交換色譜法
離子對(duì)交換色譜法是以離子交換劑為固定相的色譜方法，組分因和離子交換劑親和力的不同而被分離。柱填料含有極性可離子化的基團(tuán)，如羧酸、磺酸或季銨離子，在合適的PH值下，這些基團(tuán)將解離，吸引相反電荷的物質(zhì)。由于離子型物質(zhì)能與柱填料反應(yīng)，所以可被分離。樣品中不同的組分因離子交換平衡常數(shù)的不同而分離o離子交換色譜的流動(dòng)相一般為一定PH值的緩沖溶液，有時(shí)也加入少里的有機(jī)溶劑，如乙醇、四氫呋喃、乙腈等，以增大組分在流動(dòng)相中的溶解度。流動(dòng)相的PH值影響離子交換劑的交換容里。對(duì)弱酸或弱堿性的被分離組分，流動(dòng)相的PH值還會(huì)影響其電離狀況，流動(dòng)相的PH值必須使待分離組分處于文庫(kù)用戶免費(fèi)上傳的可與卜離。共享的文檔，具體共享方式法用于分離在測(cè)定條件下呈離解狀態(tài)的組分，如具有酸性或堿性的化合定。只要帶有以下“共享法在藥物分析中的應(yīng)用非常廣泛，例如生物堿、磺胺類(lèi)藥物、某些抗生當(dāng)便是該類(lèi)了解這檔類(lèi)型F均可采用此方法。
四、空間排斥色譜法
空間排斥色譜也稱(chēng)為凝膠色譜其固定相是具有一定孔徑范圍的多孔性物質(zhì),即凝膠。被分離組分因分子空間尺寸大小的不同而被分離。當(dāng)組分被流動(dòng)相攜帶進(jìn)入色譜柱時(shí)，體積大的分子不能進(jìn)入固定相表面的孔穴中，而隨流動(dòng)相直接通過(guò)色譜柱，保留時(shí)間最短。體積較小的分子可以進(jìn)入孔穴內(nèi)，在色譜柱中所走的途徑較長(zhǎng)，保留時(shí)間也較長(zhǎng)。分子的尺寸越小，可進(jìn)入的孔穴越多，所走的路徑越長(zhǎng)，保留時(shí)間也越長(zhǎng)。因此，凝膠色譜中，在一定范.圍內(nèi)，體積不同的分子保留時(shí)間不同，從而達(dá)到分離的目的。凝膠色譜法主要用來(lái)分離高分子化合物，如蛋白質(zhì)、多糖等。由于分子里和分子體積有關(guān)，凝膠色譜還可以用來(lái)測(cè)定組分的分子里。
五、親和色譜法
親和色譜法是利用或模擬生物分子之間的專(zhuān)-性作用，從生物樣品中分離和分析一些特殊物質(zhì)的色譜方法。生物分子之間的專(zhuān)一作用包括抗原與抗體，酶與抑制劑，激素和藥物.與細(xì)胞受體，維生素與結(jié)合蛋白，基因與核酸之間的特異親和作用等。親和色譜的固定相是將配基連接于適宜的載體上而制成的，利用樣品中各種物質(zhì)與配基親和力的不同而達(dá)到分離。當(dāng)樣品溶液通過(guò)色譜柱時(shí)，待分離物質(zhì)X與配基L形成X-L復(fù)合物，而被結(jié)合在固定相上，其他物質(zhì)由于與配基無(wú)親和力而直接流出色譜柱，用適宜的流動(dòng)相將結(jié)合的待分離物質(zhì)洗脫，如采用一定濃度的醋酸或氨溶液為流動(dòng)相，減小待分離物質(zhì)與配基的親和力，使復(fù)合物離解，從而將被純化的物質(zhì)洗脫下來(lái)。HPAC可用于生物活性物質(zhì)的分離、純化和測(cè)定，還可以用來(lái)研究生物體內(nèi)分子間的
相互作用及其機(jī)理等。
六、手性色譜法
不少有機(jī)藥物的結(jié)構(gòu)中有不對(duì)稱(chēng)碳原子，又稱(chēng)手性碳原子，有手性碳原子的藥物具有旋光性。立體構(gòu)型不同的一對(duì)對(duì)映體，其藥效、毒副作用往往不相同。例如抗高血壓藥物a -甲基多巴是S-(-)體;又如氯霉素(含有二個(gè)手性碳原子)，只有D-(-)異構(gòu)體有效。而L-(+)異構(gòu)體完全無(wú)效。沙利度胺(反應(yīng)停)的兩個(gè)對(duì)映體對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜作用的效價(jià)相近，但只有左旋異構(gòu)體才有胚胎毒及致畸作用。因此，對(duì)映體的分離，在藥物的制備和質(zhì)量控制方面，都具有重要的意義。對(duì)映體在普通條件下的理化性質(zhì)是相同的，因此分離對(duì)映體需要在手性條件下進(jìn)行。分離對(duì)映體的色譜方法稱(chēng)為手性色譜法。手性色譜法分為間接法和直接法兩種。間接法是將對(duì)映體與--定的手性衍生化試劑反應(yīng)，使其由對(duì)映體轉(zhuǎn)變?yōu)榉菍?duì)映體，再利用他們理化性質(zhì)的差異，用-般的色譜條件進(jìn)行分離。直接法不需作衍生化反應(yīng)，直接利用手性色譜柱或手性流動(dòng)相進(jìn)行分離，應(yīng)用較多。
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