二手液相二手高效液相色譜法的固定相、流動(dòng)相的要求和特點(diǎn)
二手液相二手高效液相色譜法 的固定相要求
要求:顆粒細(xì)且均勻、傳質(zhì)快、機(jī)械強(qiáng)度高、耐高壓,化學(xué)穩(wěn)定性好
液固:全多空硅膠、高庚子多空微球
二手液相二手高效液相色譜法 的流動(dòng)相要求
要求:化學(xué)穩(wěn)定性好;適宜溶解度;與檢測(cè)器相適應(yīng);純度高;粘度低。
使用前經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾,除去固體顆粒,還要脫氣處理。
二手液相二手高效液相色譜法 的固定相
常用化學(xué)鍵和相的種類
非極性鍵合相:十八烷基硅烷(ODS)最常用。一般用于反相色譜。長(zhǎng)鏈k大,載樣量高,穩(wěn)定性好。短鏈分離速度快,色譜峰對(duì)稱性好,苯基鍵合與短鏈相似。
弱極性鍵合相:醚基和二羥基鍵合相,應(yīng)用較少。
極性鍵合相:氨基、氰基,一般用于正相色譜。氰基分離選擇性類似于硅膠,對(duì)雙鍵有選擇性,對(duì)雙鍵異構(gòu)體,或含雙鍵數(shù)不同的環(huán)狀化合物有較好分離能力。一些硅膠上不能分離的極性強(qiáng)的化合物也可在氰基上分離。氨基鍵合相與酸性硅膠有不同性能,氨基可與糖分子羥基選擇性作用,從而分離糖。在酸性介質(zhì)中還是弱陰離子交換劑,能分離核苷酸。與羰基反應(yīng)。
鍵合相的性質(zhì)和特點(diǎn)
鍵合反應(yīng):主要是硅氧烷型鍵合相,以氯硅烷與硅膠進(jìn)行硅烷化反應(yīng)而制的。
含碳量和覆蓋度:鍵合相表面基團(tuán)的鍵合量可以對(duì)鍵合硅膠進(jìn)行元素分析,用含碳的百分?jǐn)?shù)表示。覆蓋度參加反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例。在鍵合反應(yīng)后用三甲基氯硅烷進(jìn)行鈍化處理,即封尾,減少對(duì)極性組分的吸附。
鍵合相特點(diǎn):化學(xué)穩(wěn)定性好,壽命長(zhǎng);均一性和重現(xiàn)性好;柱效高,選擇性好;適于梯度洗脫;載樣量大。
其他種類固定相
鍵合型離子交換劑:常用陽(yáng)離子型鍵合相是強(qiáng)蘇醒磺酸類;常用陰離子型鍵合相是季銨鹽類;還有弱酸(堿)型離子交換劑。
手性固定相(CSP):蛋白類、多糖類、環(huán)糊精、π-氫鍵型(刷型)、大環(huán)抗生素類、配體交換、其他。載樣量小,穩(wěn)定性差且價(jià)格昂貴。
親和色譜固定相:配基和載體間有一適當(dāng)長(zhǎng)度間隔臂。
二手液相二手高效液相色譜法 的流動(dòng)相
流動(dòng)相對(duì)分離的影響
分離方程式:R=\frac{\sqrt{n}}{4}\cdot\frac{\alpha-1}{\alpha}\cdot\frac{k_2}{1+k_2}
選擇合適的溶劑強(qiáng)度使組分k在最佳范圍內(nèi),選擇合適種類的溶劑改善選擇性使α增大獲得良好分離度R>1.5
溶劑極性和強(qiáng)度
在化學(xué)鍵和色譜中溶劑洗脫能力即溶劑強(qiáng)度直接與它的極性相關(guān)。
溶劑極性用溶劑極性參數(shù)表示P^\prime,用以表示正相色譜中洗脫能力
反相鍵合相色譜溶劑強(qiáng)度用另一強(qiáng)度因子S表示
混合溶劑可以用P或S的加權(quán)平均表示