檢測低豐度分析物,在復(fù)雜樣品中
樣品越復(fù)雜,質(zhì)譜系統(tǒng)越難對低豐度分析物進(jìn)行鑒定和定量分析。SWATH采集技術(shù)由TripleTOF技術(shù)提供支持,可找到所有可檢測的物質(zhì),無論它們的濃度高低。
檢測復(fù)雜樣品中的低豐度化合物充滿挑戰(zhàn),即使對于如今功能強(qiáng)大的MS分析儀來說也是如此。MS譜中的干擾會(huì)導(dǎo)致檢測低含量分析物面臨困難,即使使用高分辨率系統(tǒng)也無法解決問題。同時(shí),高含量分析物會(huì)占用質(zhì)譜儀的大量周期時(shí)間(MS/MS一般按強(qiáng)度順序采集),沒有時(shí)間捕捉與低含量分析物有關(guān)的MS/MS信息。要解決這個(gè)問題,需要在以下技術(shù)性能之間建立重要的相互關(guān)系:Q1采集窗口控制和在高速下保證MS/MS采集分辨率。
關(guān)鍵技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)1:可變窗口采集
SCIEX 的SWATH 采集技術(shù)由可變窗口采集提供支持。通過使用可以調(diào)整 Q1 隔離窗大小的控件,您可以在樣品密度高的 m/z 區(qū)域(預(yù)期有大數(shù)量的化合物和分析物的區(qū)域)利用更小的Q1 m/z 窗口。這樣一來,專一性會(huì)更高,從而能夠捕捉與樣品相關(guān)的更深入信息,降低漏掉復(fù)雜樣品中低豐度峰的風(fēng)險(xiǎn)。
以蛋白質(zhì)組學(xué)樣品為例
大量肽的質(zhì)量范圍介于500-800 m/z 之間。使用可變窗口采集,您可以在此質(zhì)量范圍內(nèi)利用更小的 Q1 SWATH 窗口(在此密集樣品區(qū)域中覆蓋更多的峰),然后在其他質(zhì)量范圍內(nèi)使用更寬的窗口??傊?,此策略可為您提供全面的分析物覆蓋,并且可以進(jìn)一步檢測樣品中的低豐度化合物。
關(guān)鍵技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)2:在高速下保證MS/MS分辨率
如前所述,復(fù)雜樣品會(huì)占用質(zhì)譜儀寶貴的掃描時(shí)間,導(dǎo)致系統(tǒng)只能有足夠的時(shí)間捕捉樣品中含量更多的分析物的 MS/MS 信息,而這些分析物可能并不是您要分析的物質(zhì)。在利用數(shù)據(jù)依賴型采集策略時(shí),低豐度化合物中檢測的峰甚至可能不會(huì)觸發(fā) MS/MS 采集,而這種采集對化合物鑒定至關(guān)重要。
借助 TripleTOF6600 和 SWATH采集技術(shù),每秒多可采集 100 張 MS/MS 譜圖,同時(shí)不會(huì)降低光譜分辨率,從而提供更高數(shù)量的 Q1 窗口。這樣不僅可以更好地檢測低含量分析物,重要的是,還可以利用每份樣品完成更多的化合物鑒定和定量分析。
首次分析時(shí)可捕捉樣品完整的數(shù)字檔案
停止儲(chǔ)存樣品,開始儲(chǔ)存數(shù)據(jù)。只需分析一次,SWATH采集技術(shù)就可以收集所需要的與樣品相關(guān)的所有數(shù)據(jù)。如果分析事件至關(guān)重要、無法重復(fù)分析、樣品數(shù)據(jù)有限或樣品可能會(huì)講解,這種技術(shù)的優(yōu)勢就更為明顯。
作為非數(shù)據(jù)依賴型采集策略,SWATH采集技術(shù)可以在所有可檢測峰上采集MS和MS/MS信息—如果以后出現(xiàn)新問題,只需重新查詢樣品數(shù)據(jù)即可。
對分析物進(jìn)行定量分析
高質(zhì)量、高專一性定量分析的核心在于出色的MS/MS靈敏度、寬動(dòng)態(tài)范圍和非凡重現(xiàn)性。SWATH采集技術(shù)采用SCIEX TripleTOF技術(shù),可提供上述三種優(yōu)勢。
通常,不僅僅是樣品的成分十分重要,樣品中成分的"含量"對我們得出的結(jié)論或制定決策也很關(guān)鍵。SWATH采集技術(shù)是一種非數(shù)據(jù)依賴型策略,擁有其他技術(shù)所不具備的功能。從使用高分辨率MS/MS數(shù)據(jù)(通過MS)提供深度高一個(gè)數(shù)量級的定量覆蓋,到經(jīng)過驗(yàn)證的樣品間重現(xiàn)性,SWATH采集可以提供可靠的定量結(jié)果,從而推進(jìn)研究,達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的MRM定量分析策略水平。