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色譜圖其實簡單地講是一個橫坐標(biāo)是時間縱坐標(biāo)是電信號的二維圖譜。
高效液相色譜法，你可以簡單地想象，固定相是一個多空海綿狀的柱形結(jié)構(gòu)，樣品在孔洞中進進出出。因為各個物質(zhì)的吸附能力不同，所以才會在色譜圖中拉開距離。
實驗相關(guān)的參數(shù)：
1、保留時間：也就是可以定性的數(shù)據(jù)參數(shù)
如果使用同樣的色譜柱，同樣的流動相，分析同樣的樣品，那么這個樣品的保留時間，應(yīng)該是固定的。不同保留時間的色譜峰，應(yīng)該表現(xiàn)出的是不同的物質(zhì)。如果你跑的是反相色譜，那么色譜峰越靠后，它對應(yīng)物質(zhì)的極性也就越小。
2、峰面積：也就是可以定量的數(shù)據(jù)參數(shù)
一旦分離，這些成分就被轉(zhuǎn)換成電離狀態(tài)。MS使用質(zhì)荷比作為鑒別組分的特征因子，因此下一步涉及在此基礎(chǔ)上分離組分。質(zhì)荷比對特定分子比HPLC中的保留時間更特異，這就是為什么使用MS。質(zhì)量電荷差異分析儀，就像HPLC中的分離技術(shù)一樣，可以有所不同，包括四極桿、飛行時間和離子阱等分析儀。然后由檢測器對出現(xiàn)的離子進行計數(shù)。產(chǎn)生的MS光譜顯示了質(zhì)荷比與峰值強度的關(guān)系。
色譜圖顯示組分作為保留時間和質(zhì)荷比與質(zhì)量相對豐度的函數(shù)，這意味著全LC-MS的總輸出是一個具有兩個水平軸的圖表。圖表的焦點可以根據(jù)研究人員的目標(biāo)而改變。
峰值檢測在濾波之后進行，其中峰值表示成分或成分的斷裂。峰可以根據(jù)它們覆蓋的高度或面積來選擇。通過將存在的峰與已知的峰進行匹配，可以通過眼睛識別某些峰模式。這可以幫助確定存在什么分子，或者分子中存在多少原子。
在色譜圖中可以讀出來的參數(shù)，在同一個色譜條件下，同一個物質(zhì)的濃度和峰面積是成正比的。也就是說，如果你配制1.0mg/ml的X物質(zhì)，進樣后峰面積是10000，那么，你配制0.5mg/ml的X物質(zhì)，進樣后峰面積差不多就是5000
3、波長:這個是可以順利進行試驗的前提條件
同一樣品，同一方法，同一色譜柱，在不同波長的峰面積是不同的。一個物質(zhì)指在某些特殊波長下有吸收。比如一個物質(zhì)在210nm和254nm處有吸收。那么波長在280nm處可能無法檢出該物質(zhì)。所以一個實驗方法開始時要進行波長掃描。
頻譜濾波旨在去除數(shù)據(jù)中的噪聲，從而便于檢測感興趣的峰值。在LC - MS過程中，除了其他方法之外，還可以通過使用具有較小粒徑的較短柱來優(yōu)化降噪。
分析物的色譜圖不變，因此它通常可用作分子類型的指紋。
這通常通過觀察保留時間和質(zhì)荷比的峰值在哪里來實現(xiàn)。目前，色譜圖的大多數(shù)分析都是通過計算完成的。這意味著軟件會將生成的色譜圖與已知的色譜圖進行比較，以識別成分，或者將其存儲為新發(fā)現(xiàn)的色譜圖。
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