二手多級質(zhì)譜聯(lián)用是通過對一級或上級質(zhì)譜產(chǎn)生離子的進一步裂解產(chǎn)生次級質(zhì)譜,并對次級質(zhì)譜進行質(zhì)量分析的技術(shù)。依據(jù)實現(xiàn)方式,多級質(zhì)譜可分為兩類:一類是時間串聯(lián)質(zhì)譜,它是利用某些質(zhì)量分析器能夠儲存離子的特性,在同一個質(zhì)量分析器上,通過時間序貫實現(xiàn)多級質(zhì)譜分析;另一類是空間串聯(lián)質(zhì)譜,它是利用多個質(zhì)量分析器在空間上串聯(lián)從而實現(xiàn)多級質(zhì)譜的功能。
二手多級質(zhì)譜聯(lián)用之時間串聯(lián)質(zhì)譜法
時間串聯(lián)質(zhì)譜主要是由離子阱或FT一ICR完成操作。從“硬件”方面來看,只需要一個質(zhì)量分析器,因而儀器費用較空間串聯(lián)質(zhì)譜要低,這是時問串聯(lián)質(zhì)譜的最大優(yōu)點。
也正因為這個原因,時間串聯(lián)質(zhì)譜可達到多級(MSn),這是空間串聯(lián)質(zhì)譜所不能及的。
在離子阱中完成串聯(lián)質(zhì)譜的實驗步驟組成:
①按前述的離子阱穩(wěn)定性圖,選擇適當?shù)膗、P值,可選出某一質(zhì)荷比的離子貯存在離子阱中,質(zhì)荷比更大或更小的其它離子均逐出離子阱。
②進行碰撞誘導斷裂CID。由于離子阱在運行時是充氦氣的,加大初始離子(pre.cursor ion)的動能即可實現(xiàn)CID。例如,在端蓋極上加一個輔助的正弦波形的“擾動(tickle)”電位,其頻率調(diào)諧至離子運動的基頻,因此離子從這個輔助的“擾動"電場中吸收能量,這是一個共振激發(fā)的過程。仔細控制擾動電位的振幅,使離子不致于從離子阱中逐出,但離子已從離子阱的中心拉出來,增加了動能,和氦氣分子碰撞,發(fā)生CID。
③進行質(zhì)量掃描,得到產(chǎn)物離子的質(zhì)譜,這由掃描V而完成。
以上一個循環(huán)由計算機控制完成。必要時,可進行下一級乃至多級(Msn)實驗。
由于離子在離子阱中不斷作回旋性的運動,因而有較高的碰撞效率。時間串聯(lián)質(zhì)譜只能完成產(chǎn)物離子掃描,不能進行初始離子掃描和中性碎片丟失掃描,但產(chǎn)物離子掃描是最重要的一種掃描。
離子阱質(zhì)譜法(ITMS)和傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜法(FTICRMS,即FTMS)的發(fā)展,使MSn(n>2)成為可能,這兩種方法均有離子貯存及選擇性排斥功能。MSn實驗是通過軟件實現(xiàn)的,樣品離子化后,用脈沖程序?qū)⑦x定的m/z離子以外的其他離子排斥出去,用脈沖閥導入碰撞氣體,將選定的離子加速至足夠的動能,經(jīng)CID得到產(chǎn)物離子。上述程序可重復進行,直至實現(xiàn)MSn。
二手多級質(zhì)譜法的源內(nèi)CID(in—source CID)是利用API—MS的離子傳輸區(qū)的電場,在約133Pa的壓力下,碰撞誘導離子裂解,產(chǎn)生CID譜。
優(yōu)點:碰撞活化效率高,因而靈敏度高;簡便,不必知道Ma+的m/z;可選擇的能量范圍較寬,以適應于不同穩(wěn)定性的化合物;儀器簡單、價廉。所以,在藥物分析中可以解決多數(shù)定性、定量問題。
缺點:如有雜質(zhì)及共流出峰存在將產(chǎn)生復雜的結(jié)果;由于需進行色譜分離,因而增加了分析時間。
無論是哪種方式的串聯(lián),都必須有碰撞活化室,從第一級MS分離出來的特定離子,經(jīng)過碰撞活化后,再經(jīng)過第二級MS進行質(zhì)量分析,以便取得更多的信息。