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二手LCMS樣品制備方法

1樣品處理的好壞直接關(guān)系到整個(gè)二手LC-MS分析的成敗，必須要有成熟規(guī)范的樣品制備方法。

2樣品預(yù)處理各步不能隨意省略，如萃取、分離、去鹽等。某些化合物必須進(jìn)行化學(xué)衍生化以適應(yīng)LC-MS要求，如磷酸酯水解。

3若MS信號(hào)實(shí)在太低，考慮更換樣品前處理方法。

4濃度非常低的樣品不能保存太長(zhǎng)時(shí)間，容器吸附、分解等原因使樣品濃度降低，標(biāo)準(zhǔn)品工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

離子化方法選擇：根據(jù)樣品性質(zhì)確定離子化方式適合ESI(IS)的樣品類型。

高極性化合物、蛋白質(zhì)、肽類，低聚核苷酸等生物分f：-肢類，季銨鹽等。
含雜原子的化合物：如氨基甲酸酯等適合APCI的樣品類型。
弱極性沖等極性的小分子，如脂肪酸，鋁苯二甲酸等-含雜原子的化合物，如氨基甲酸酶、脈等ESI不適合的化合物:極端非極性化合物如苯等。
APCI不適合的化合物：非揮發(fā)性樣品， 熱穩(wěn)定性差的樣品離子化方法選擇。

一般情況下
堿性化合物宜用正離子方式
酸性化合物宜用負(fù)離子方式
不明確的化合物，優(yōu)先試用正離子方式
如未知，可能正、負(fù)都要試
*有些化合物正、 負(fù)模式都出峰，選擇靈敏度高的方式。

  LC條件的選擇：根據(jù)化合物類型選擇流動(dòng)相組成，甲醇水，么腈水或甲醇-乙。
*某些化合物只有某種流動(dòng)相體系才出峰。
*一股正離子方式用甲醇，負(fù)離子方式用乙腈好些其等。
*通常有機(jī)相比例高些，離子化效率高。
*梯度的設(shè)定:梯度變化太快對(duì)離子化效率影響很大，相應(yīng)源參數(shù)也應(yīng)該改變，所以當(dāng)恒定比例流動(dòng)相(即等度分離能滿足分離分析耍求時(shí)，盡量不用梯度，尤其定量分析時(shí)。
*有時(shí)，流動(dòng)相中加入微量的甲酸或乙酸銨等，可提高正離子化效率。

LC條件的選擇:
*是否加酸不是絕對(duì)的，具體應(yīng)根據(jù)LC的分離情況、樣品在酸性條件下的穩(wěn)定性等決定。
通常pH值低時(shí)，[M+H]+ 比率高: pH值高時(shí)，[M+Na] +、[M+K]+,或[M+NH4] +比率會(huì)比較高。
定性分析時(shí)，有時(shí)加一些NH，Li+等，可幫助確定判斷母離子，對(duì)碎片較少的化合物，可以增加其質(zhì)譜特征性，但會(huì)使生物大分子的質(zhì)譜復(fù)雜化。
水的選擇:娃哈哈純凈水比普通蒸餾水好，若在玻璃瓶中已存放時(shí)間太長(zhǎng)，有可能變質(zhì)。當(dāng)本底增大，LC壓力增高，應(yīng)更換水相在色譜柱和MS允許情況下，LC流量適當(dāng)提高，可以壓縮峰寬，使峰強(qiáng)度提高。

LC條件的選擇

溶解樣品的溶劑:用與流動(dòng)相相同的溶劑體系做溶劑，一般水含量較高時(shí)，蜂形好，通常含水量80-90%。

如果常用的流動(dòng)相體系不能很好地溶解樣品,可用少量特殊溶劑先將樣品溶解后，再用流動(dòng)相稀釋。

當(dāng)只有粗色譜柱，只能用大流量時(shí)可采用三通分流，以適應(yīng)MS的流量要求選細(xì)色譜柱，如內(nèi)徑2mm,進(jìn)樣量可以小，提高相對(duì)濃度，離子化效率，靈敏度。

換長(zhǎng)些的色譜柱，對(duì)定性分離效果好，但分析時(shí)間延長(zhǎng)，如峰形仍不理想，可考慮另選其他型號(hào)色譜柱。

當(dāng)不得不用高濃度TFA時(shí)，可在柱后添加并丙醇，緩解信號(hào)抑制問題。柱后衍生化，有時(shí)可增加離子化效率。

二手LCMS調(diào)機(jī)準(zhǔn)備 

儀器平衡時(shí)間：有條件時(shí)盡可能長(zhǎng)些，對(duì)分析有利。平衡時(shí)需平衡的因素有真空、溫度、LC流動(dòng)相比例等。
容器污染：塑料離心管很容易混入添加劑，尤其是被有機(jī)溶劑浸泡時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，干擾物信號(hào)有時(shí)會(huì)超過待測(cè)物。
LC PUMP脫氣，先放掉柱前部管路中液體，排凈氣泡，還要注意儲(chǔ)液瓶液面高度。