色譜法稱“色譜分析”、“色譜分析法”、“層析法”,是一種分離和分析方法,在分析化學(xué)、有機化學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。
色譜法常見的方法有:柱色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。
色譜法是一種重要的分離分析方法,它是利用不同物質(zhì)在兩相中具有不同的分配系數(shù)(或吸附系數(shù)、滲透性),當兩相作相對運動時,這些物質(zhì)在兩相中進行多次反復(fù)分配而實現(xiàn)分離。
二手氣相色譜儀和二手液相色譜儀隨之出現(xiàn)
在色譜技術(shù)中,流動相為氣體的叫氣相色譜,流動相為液體的叫液相色譜。固定相可以裝在柱內(nèi),也可以做成薄層。前者叫柱色譜,后者叫薄層色譜。根據(jù)色譜法原理制成的儀器叫色譜儀,目前,主要有氣相色譜儀( 二手氣相色譜儀 )和液相色譜儀( 二手液相色譜儀 )。
色譜法的創(chuàng)始人是俄國的植物學(xué)家茨維特。1905年,他將從植物色素提取的石油 醚提取液倒人一根裝有碳酸鈣的玻璃管頂端,然后用石油醚淋洗,結(jié)果使不同色素得到分離,在管內(nèi)顯示出不同的色帶,色譜一詞也由此得名。這就是最初的色譜法。后來,用色譜法分析的物質(zhì)已極少為有色物質(zhì),但色譜一詞仍沿用至今,在50年代,色譜法有了很大的發(fā)展。
1952年,詹姆斯和馬丁以氣體作為流動相分析了脂肪酸同系物并提出了塔板理論。用氣體作為流動相進行色譜分離的想法,他們用硅藻土吸附的硅酮油作為固定相,用氮氣作為流動相分離了若干種小分子量揮發(fā)性有機酸。
1956年,范第姆特總結(jié)了前人的經(jīng)驗,提出了反映載氣流速和柱效關(guān)系的范笨姆特方程,建立了初步的色譜理論。
同年,高萊(Golay)發(fā)明了毛細管拄,以后又相繼發(fā)明了各種檢測器,使色譜技術(shù)更加完善。
50年代末期,出現(xiàn)了氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用的儀器( 二手氣質(zhì)聯(lián)用 ),克服了氣相色譜不適于定性的缺點。隨后,由于檢測技術(shù)的提高和高壓泵的出現(xiàn),高效液相色譜迅遠發(fā)展,使得色譜法的應(yīng)用范圍大大擴展。目前,由于高效能的色譜往、高靈敏的檢測器及微處理機的使用,使得色譜法已成為一種分析速度快、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣的分析儀器。
1960年代,為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易汽化的大分子物質(zhì),氣相色譜(二手氣相色譜)的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。
1960年代末科克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)了世界上第一臺高效液相色譜儀,開啟了高效液相色譜的時代。高效液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱,提高色譜柱的塔板數(shù),以高壓驅(qū)動流動相,使得經(jīng)典液相色譜需要數(shù)日乃至數(shù)月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內(nèi)完成。
1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現(xiàn)代實踐》一書,標志著高效液相色譜法(HPLC)正式建立。在此后的時間里,高效液相色譜成為最為常用的分離和檢測手段,在有機化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物開發(fā)與檢測、化工、食品科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測、商檢和法檢等方面都有廣泛的應(yīng)用。高效液相色譜同時還極大的刺激了固定相材料、檢測技術(shù)、數(shù)據(jù)處理技術(shù)以及色譜理論的發(fā)展。
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