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高效液相色譜法HPLC又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、化學(xué)鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測器等新實(shí)驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。
特點(diǎn)：①高壓;②高速;③高效;④高靈敏度;⑤應(yīng)用范圍廣;⑥柱子可反復(fù)使用;⑦樣品量少、容易回收.
氣相色譜GC分析是指流動相為氣體的色譜分析法。氣體和易于揮發(fā)的液體或固體 等試佯都可用氣相色譜分析進(jìn)行分離和測定。
特點(diǎn)：①分析速度快;②選擇性好;③分離效能高;④靈敏度高;⑤應(yīng)用范圍廣。
二手高效液相色譜分析法(HPLC)，它的基本概念及理論基礎(chǔ)（如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等），與二手氣相色譜GC是一致的，但又有不同之處：
分析對象的區(qū)別
GC：適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品;但對高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、 熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品，尤其對大多數(shù)生化樣品不可檢測 占有機(jī)物的20%
HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品(包括有機(jī)介質(zhì)溶液)，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測 用途廣泛，占有機(jī)物的80%。
進(jìn)樣方式的不同,高效液相色譜HPLC只要將樣品制成溶液，而氣相色譜GC需加熱氣化或裂解。
流動相差別的區(qū)別
GC：流動相為惰性，氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相有相互作用。
HPLC：流動相為液體，流動相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對分離起正向作用。且流動相種類較多，選擇余地廣，改變流動相極性和pH值也對分離起到調(diào)控作用，當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相也可以增大分離選擇性。
流動相的不同，在被測組分與流動相之間、流動相與固定相之間都存在著一定的相互作用力.
操作條件差別
GC：加溫操作
HPLC：室溫;高壓(液體粘度大，峰展寬小)
二手高效液相色譜HPLC是在液相中進(jìn)行，對被測組分的檢測，通常采用靈敏的濕法光度檢測器，例如，紫外光度檢測器、示差折光檢測器、熒光光度檢測器等；
二手高效液相色譜HPLC的定性和定量分析，與二手氣相色譜GC分析相似，在定性分析中，采用保留值定性，或與其他定性能力強(qiáng)的儀器分析法連用；在定量分析中，采用測量峰面積的歸一化法、內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法等，但高效液相色譜在分離復(fù)雜組分式樣時，有些組分常不能出峰，因此歸一化法定量受到限制，而內(nèi)標(biāo)法定量則被廣泛使用。
此外二手高效液相色譜HPLC還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長，相互補(bǔ)充。二手高效液相色譜LPLC的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。二手高效液相色譜檢測器HPLC的靈敏度不及二手氣相色譜GC。
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